Sposobnost korištenja eholokacije za navigaciju ključna je za opstanak šišmiša. Pomaže im da lete u mraku i pronađu hranu, posebno insekte, čak i u potpunom tami ili složenim okruženjima poput špilja. Analizirajući odjeke njihovih poziva, šišmiši mogu odrediti veličinu, oblik, udaljenost, smjer i brzinu predmeta u svojoj okolini.
Neke vrste šišmiša emitiraju stalne visokofrekventne zvukove dok lete, dok druge proizvode kratke zvukove. Dok su zvučni valovi koje emitiraju šišmiši udarali u obližnje predmete, valovi odbijaju natrag i stižu do ušiju šišmiša, koji su vrlo osjetljivi na ove frekvencije. Šišmiši tada koriste vrijeme odjeka koji se vraćaju i razlike u tonu ili intenzitetu zvuka kako bi stvorili mentalnu sliku svoje okoline.
Šišmiši mogu točno odrediti udaljenost objekata mjerenjem vremena koje je potrebno da zvučni valovi odskoče. Učestalost i trajanje odjeka koji se vraćaju također im pomažu u procjeni veličine i oblika predmeta u okolišu. Neke vrste šišmiša mogu čak identificirati vrste insekata na koje plijene analizirajući odjeke koji odbijaju od krila.
Sposobnosti eholokacije šišmiša razvile su se do visokog stupnja preciznosti, omogućujući im da lete kroz složena okruženja, pa čak i male praznine bez sudara s preprekama. Njihovi pozivi za eholokaciju mogu se razlikovati u učestalosti, pulsu i trajanju, ovisno o vrstama šišmiša i njihovim specifičnim prilagodbima različitim staništima i strategijama lova.