1. Složenost uzorka :Tekućinska kromatografija općenito je manje učinkovita za odvajanje složenih uzoraka s velikim brojem komponenti. To je zato što što je više komponenti prisutno u uzorku, to postaje teže postići dobro odvajanje i rezoluciju.
2. Uzorak učinaka matrice :Matrica uzorka također može ometati kromatografsko odvajanje. Na primjer, ako uzorak sadrži visoke razine soli ili drugih nehlapljivih spojeva, oni se mogu natjecati s analitima za vezanje na stacionarnu fazu, što dovodi do lošeg odvajanja.
3. Preopterećenje stupaca :Ako se previše uzorka ubrizga u kolonu, to može preopteretiti stacionarnu fazu i rezultirati lošim odvajanjem. To je zato što će se molekule uzorka natjecati za mjesta vezanja na stacionarnoj fazi, što dovodi do širenja vrha i smanjene rezolucije.
4. Sastav mobilne faze :Sastav mobilne faze također može utjecati na učinkovitost tekućinske kromatografije. Na primjer, ako je mobilna faza previše polarna, može dovesti do lošeg zadržavanja analita na stacionarnoj fazi, dok ako je mobilna faza previše nepolarna, može dovesti do lošeg odvajanja analita.
5. Temperatura :Temperatura također može utjecati na učinkovitost tekućinske kromatografije. Na primjer, ako je temperatura previsoka, to može dovesti do povećanog širenja vrpce i smanjene rezolucije, dok ako je temperatura preniska, to može dovesti do lošeg oblika vrha i smanjene osjetljivosti.
6. Instrumenti :Kvaliteta instrumentacije koja se koristi za tekućinsku kromatografiju također može utjecati na njenu učinkovitost. Na primjer, ako crpka ne može isporučiti dosljednu brzinu protoka, to može dovesti do lošeg odvajanja i smanjene ponovljivosti. Slično, ako detektor nije dovoljno osjetljiv, možda neće moći otkriti niske razine analita.
Razumijevanjem i rješavanjem ovih potencijalnih ograničenja, moguće je optimizirati tehnike tekućinske kromatografije za maksimalnu učinkovitost.