Pripremna faza: U ovoj početnoj fazi, molekula šećera sa 6 atoma ugljika (obično glukoza) se dva puta fosforilira kako bi se formirao fruktoza-1,6-bisfosfat. Ovaj proces zahtijeva unos 2 ATP molekule i koristi enzime heksokinazu i fosfofruktokinazu.
Faza cijepanja: Tijekom ove faze, fruktoza-1,6-bisfosfat se cijepa na dva šećera s 3 ugljika:gliceraldehid-3-fosfat (GAP) i dihidroksiaceton fosfat (DHAP). Ove 2 molekule su međusobno konvertibilne i obje mogu ići dalje u putu.
Faza isplate: Ova posljednja faza uključuje pretvorbu GAP i DHAP u piruvat, generirajući ATP i NADH u procesu. Ovaj stupanj sastoji se od nekoliko enzimskih koraka, uključujući fosforilaciju na razini supstrata i reakcije oksidacije. U konačnici se proizvode 2 molekule piruvata zajedno s ukupno 4 molekule ATP i 2 molekule NADH za svaku molekulu glukoze koja ulazi u glikolizu.